那些我们彻夜未眠搞不懂的ELISA试剂盒知识

ELISA试剂盒近日网上关于的讨论帖子很多，今天也发表一下自己的一些看法，对ELISA的见解有不对的地方，希望指正或者直接拍砖。其实很多客户上当受骗都和网络有关系，如果你不是在网上找试剂，而是认真看看帖子，可能会改变你原来的选择。
ELISA试剂盒首先，谈一下市场。首先RnD和Bender等一些的还是很值得信赖的，也得到了市场的认可，特别是RnD的盒子，我们卖的很好，就是价格好贵，经费不是很充裕的实验室难消费的起。
第二，谈一下如何灵活应用ELISA这个检测方法以及如何去挑选ELISA试剂盒。ELISA这个方法的原理，大家都很清楚，网上的资料一大堆。可真正用起来的时候，有时候就有点犯糊涂，我谈一下自己的理解。
1、对于一些小分子的检测，比如前列腺素、糖皮质激素的检测，我的理解是要用竞争法ELISA去检测，也要购买采用这个方法的盒子。一般细胞因子的检测，都是采用常规的夹心法ELISA检测，因为因子分子量比较大，一般10几个KD左右，很容易找到两个或者多个抗原表位。而小分子很难找到两个不同的表位，也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案就是酶标板上包被二抗，每个孔加入一定量的酶标的小分子，然后加样品，再加不带标记的检测抗体，显色底物。样品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。
2、对于胰岛素的检测，我还是推荐millpore 旗下LInco公司的检测试剂盒，不管是放免还是ELISA，据说权在他们手中。
3、有些客户会用OVA（卵清蛋白）做一些哮喘，过敏性肠炎的模型，后来会检测粘膜特异性的sIgA以及血清里面IgG，IgE等指标。当客户向我咨询购买这几个指标的盒子的时候，我很肯定地说这些指标的检测要你自己特制，不会有商品化的盒子出售的。当baidu，google一下，页面出来大量的商品化的盒子，千篇一律的说明书时候，我真的是蒙了，我怀疑自己跟不上时代了。我这里不去评论这些盒子的真假，我仍然建议做这些检测指标的战友，选择sigma公司V级别的OVA，然后用这个来造模，自己包板摸条件，用OD值来比较抗体含量的变化。
4、ELISA检测方法简单，灵敏度高，我个人觉得ELISA检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量检测；病原体抗原的定性与定量；评估自己制备的血清抗体的效价等。好多客户有个误区，拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测，我还是建议多动脑，该检测活性的检测活性，该做western的做western。
5、我主要的客户是医学院校，做实验面向的种属主要是人，大鼠和小鼠，现在市面上鸡、牛、马、羊、兔各种指标的盒子都有售，真不知道这些抗体是怎么来的。据我所了解，这些炎症指标还是有很大种属特异性的。
ELISA试剂盒NO的检测，一般都是采用经典的Greiss法，现在市场上竟然有NO ，真是彻夜未眠也搞不明白。