人血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA试剂盒说明书

人血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人血管内皮细胞生长因子（VEGF）酶联免疫诊断试剂盒

使用目的：
本试剂盒用于测定人血清，血浆及其它相关液体样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF）含量。

实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平。用纯化的人血管内皮细胞生长因子（VEGF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的血管内皮细胞生长因子（VEGF）标准品和未知浓度的血管内皮细胞生长因子（VEGF）待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的血管内皮细胞生长因子（VEGF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF）浓度。
试剂盒组成

1
 20倍浓缩洗涤液
 50ml×1瓶
9
 标准品S1（800pg/ml）
 0.5ml×1瓶
 
2
 链霉亲和素-HRP
 6ml×1瓶
 标准品S2（600pg/ml）
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶标包被板
 12孔×8条
 标准品S3（300pg/ml）
 0.5ml×1瓶
 
4
 生物素标记的抗-IgG抗体
 6ml×1瓶
 标准品S4（150pg/ml）
 0.5ml×1瓶
 
5
 显色剂A液
 6ml×1瓶
 标准品S5（75pg/ml）
 0.5ml×1瓶 
 
6
 显色剂B液
 6ml×1/瓶
 10
 密封袋
 1个
 
7
 终止液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 3张
 
8
 样品稀释液
 6ml×1瓶
 12
 说明书
 1份
 

 
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤
1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2.       加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl（样品zui终稀释度为5倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
3.       配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。
5.       加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

6.       洗涤：操作同4。

7.       加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
8.       洗涤：操作同4。

9.       显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.   终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.   测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 
计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数（×5×n）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

线形范围：
30pg/ml-1000pg/ml
规格：
96人份/盒

保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

  
 ELISA试剂盒