物的催化作用ELISA与细胞相结合

ELISA试剂盒技术原理：以免疫学反响为根底，将抗原、抗体的特异性反响与酶对底
1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。
2. 结合在固相载体外表的抗原或抗体仍坚持其免疫学活性。
3. 酶符号的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
4. 受检标本与固相载体外表的抗原或抗体起反响。再参加酶符号 的抗原或抗体，也经过反响而结合在固相载体上。
5. 此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必定的份额。
6. 参加酶反响的底物后，底物被酶催化变成有色产品，产品的量 与标本中受检物质的量直接有关，故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析。测定办法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水 平），而且重复性好。
ELISA试剂盒样本处理及请求：
1. 血清：室温血液天然凝固10-20分钟，离心20分钟摆布（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保留过程中如呈现沉积，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的请求挑选EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟摆布（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保留过程中如有沉积构成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管搜集，离心20分钟摆布（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保留过程中如有沉积构成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检查排泄性的成份时，用无菌管搜集。离心20分钟摆布（2000-3000转/分）。细心搜集上清。检查细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度到达100万/ml摆布。经过重复冻融，以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟摆布（2000-3000转/分）。细心搜集上清。保留过程中如有沉积构成，应再次离心。
5. 安排标本：切开标本后，称取分量。参加必定量的PBS，PH7.4。用液氮敏捷冷冻保留备用。标本消融后依然坚持2-8℃的温度。参加必定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充沛。离心20分钟摆布（2000-3000转/分）。细心搜集上清。分装后一份待检查，其他冷冻备用。
6. 标本收集后尽早进行获取，获取按有关文献进行， ELISA试剂盒获取后应尽快进行实验。若不能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应防止重复冻融。