研域(上海)技术支持让ELISA实验更加精彩!
不少朋友在为中秋前的zui后一次实验仔细预备着,而在实验的过程中大大小小的问题总会遇到一些。今天上午,一位来自上海科研所的客户孙教师来电与我公司技术专员交流ELISA实验问题。在交流的过程中,孙教师标明:
“做定量要验证试剂盒的线性规划,现在我的盒子线性规划太窄,线性区间的高点与低点的浓度值比值为16。我检验了改动反应方式,将线性规划略扩宽了一些——线性区间的高点与低点的浓度值比值为32。假设高点往上一个梯度延伸,则R平方就只有0.96(已经是的成果了)。总的来说线性规划仍是太窄。我参看了其他一些厂家的ELISA定量试剂盒,基本上线性区间的高点与低点的浓度值比值都≥64。我知道,ELISA的信号值规划窄,但我想线性区间的高点与低点的浓度值比值≥64应该仍是可以的。那么怎样才能将试剂盒的线性规划扩宽?"
对此,研域(上海)技术专员分析解说到:试剂盒的线性规划影响的首要要素应该是抗体本身的性质,其次才是ELISA反应的各种条件。假设在优化了各种反应条件下线性规划仍是很窄,只能说制的抗体不是很好。而线性规划的影响有两个要素,*个可能要素是本身抗体的亲和力,亲和力越高灵敏度越高,高点与低点比值也就越高,若规范曲线的斜率接近于1,抗体亲和力仍是可以的。比值没有相关规定说一定要高于64。
第二个可能要素是本身抗原的影响。不同的蛋白ELISA其灵敏度都不相同,线性规划也不同,假设你的项目在某一浓度抵达途径值,说明这个蛋白与其抗体结合与解离在此浓度下抵达了平衡,改动其他条件也无法增加,除非改用化学发光法。若是同一种蛋白其线性规划没有其他盒子做的高,可检验改动条件下降其布景值然后下下降浓度来前进比值。
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