研域（上海）教您细胞是怎么转染的

 转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。跟着基因与蛋白功用研讨的深化，转染现在已成为试验室工作中常常触及的底子方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微打针和基因枪归于通过物理方法将基因导入细胞的*；化学介导方法许多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
 志向细胞转染方法，应该具有转染功率高、细胞毒性小等长处。病毒介导的转染技术，是现在转染功率的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的预备程序杂乱，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般试验室中很难广泛。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特色。
需求指出的一点，不管选用哪种转染技术，要取得*优的转染效果，或许都需求对转染条件进行优化。影响转染功率的要素许多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长情况，到转染方法的操作细节，都需求考虑。
一、细胞传代
1. 试验预备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。
2. 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗刷两次。
3. 用Tip头参与1ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。用手轻拍培养瓶壁，查询到细胞*从壁上脱落下来中止。
4. 参与1ml的含血清培养基中止反应。
5. 用Tip头屡次吹吸，使细胞*分散开。
6. 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。
7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞参与一个35mm培养皿。
8. 将适合体积*培养液参与离心管中，混匀细胞后悄然参与培养皿中，使其均匀分布。
9. 将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。
二、细胞转染
1. 转染试剂的预备
① 将400ul去核酸酶水参与管中，轰动10秒钟，溶解脂状物。
② 轰动后将试剂放在－20摄氏度保存，运用前还需轰动。
2. 选择适合的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中参与适合体积的无血清培养基。参与适合质量的MyoD或许EGFP的DNA，轰动后在参与适合体积的转染试剂，再次轰动。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或许无血清培养基清洗一次。
5. 参与混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 届时后，根据细胞品种决议是否移除混合液，之后参与*培养基继续培养24－48小时。
三、第2次细胞传代
1. 在转染后24小时，查询试验效果并记载绿色荧光蛋白表达情况。
2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色适合的密度0.8X105个细胞/35mm培养皿将细胞从头转入培养皿中。
3. 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。