ELISA试剂盒的测验要求

正式实验时，应别离以阳性对照与阴性对照控制实验条件，待检样品应作一式二份，以确保实验成果的准确性。有时本底较高，阐明有非特异性反响，可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
实验条件的挑选
在ELISA中，进行各项实验条件的挑选是很重要的，其间包括:
(1) 固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反响，调查其显色反响是否均一性，据此判明其吸附功能是否杰出。
(2) 包被抗体(或抗原)的挑选：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它实验条件相同时，调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。
(3) 酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体别离为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其作业浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后，应加入强酸或强碱以终止反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物使用液有必要新鲜制造，尤其是H2O2在临用前加入。