实验ELISA试剂盒注意事项有哪些
一年有四个时节,每个时节都有不同的景色,而我喜欢秋季起时的壮丽景色。秋季,人们好象来到了一个幽雅安静的jing界,来到了一个晶亮透剔的童话般的。松的那清香,白雪的那冰香,给人一种凉莹莹的劝慰。一切都在过滤,一切都在进步,连我的心灵也在净化,变得纯洁而又夸姣。
在ELISA试验前的注意事项
1、仔细阅读说明书
2、确认试剂盒在有效期内
3、按说明书确认一切试剂*(数量、体积)
4、标本制备要标准,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(储存),尽量分装做备份。短期内无法试验者,注意低温保存
5、准备好一切试验额定所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等
6、依据检测标本数量确认所需试剂的量
7、按说明书将所用试剂平衡至室温,制造所需试剂
ELISA试验时,注意事项如下:
1.正式试验时,应别离以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证试验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反响,可采用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
2.在ELISA中,进行各项试验条件的挑选是很重要的,其间包含:
(1)固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在运用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反响,查询其显色反响是否均一性,据此判明其吸附性能是否出色。
(2)包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有必定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相一同,查询阳性标本的OD值。挑选OD值大而蛋白量少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。