试剂盒售后解析ELISA测定结果

今早，我公司吴收到由沈阳农业大学朱老师发来的会话。朱老师在2015年连续购买了6次ELISA试剂盒，上周，朱老师我司技术说想要试试自己配的试剂盒，看看检测效果。在朱老师给吴的会话中表示：“我的这个检测结果不理想，不知道是哪里出了问题。帮我看下是什么原因可以吗？”我公司试剂盒售后客服吴说可以，并为朱老师安排技术解析Elisa试剂盒测定结果。

    朱老师的主要问题是：我自己合成8个氨基酸的抗原短肽，和BSA耦连后免疫动物，1个月后用ELISA测定血清中针对抗原短肽的抗体滴度，具体步骤：用碳酸缓冲液溶解抗原短肽后包板，4度冰箱18小时，再用1%OVA37度封闭2小时，洗板3次。待测血清用10%小牛血清倍比稀释，37度温育1小时，洗板3次，加入二抗，37度温育40分钟，洗板3次，加TMB显色，结果比较诡异，阴性对照也显色了，且OD值和阳性差别不大。是什么原因呢？是洗板的问题吗？ 

    十分钟后，技术员给朱老师去解答。可以根据这几个方面分析： 

1.洗板是否串孔，如串孔的话可能造成污染;你一抗、二抗每次洗板时洗5遍以上。

2.封闭液的问题，你说阴性对照也显色了，那主要的问题应该是封闭，应重新考虑用OVA封闭是否适合，如果OVA封闭效果不好的话可以选择其他的封闭液。封闭液的选择园子里有很多相关的帖，你搜一下看看。

3.建议ELISA试剂盒包被在37度两小时，这样的效果可能会好一些。

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