ELISA试剂盒实验有哪些步骤

上海研域生物ELISA试剂盒是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。虽然ELISA试剂盒的操作步骤看似简单易操作，但如果我们在实验的时候细节没做到位的话就会直接影响实验的效果。所以我们要注重ELISA试剂盒实验时至关重要的步骤有哪些呢？今天带大家一起来了解下：

、重要的洗涤：

不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。有必要的话，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。

第二、关键的封闭：

封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。如果背景过高，怀疑封闭不充分，那么可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。

目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。

第三、抗体浓度须优化：

如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。

第四、检测试剂要适量：

切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。

只有确保每一步操作都做到位，才会呈现理想的实验结果。所以ELISA实验的每一步都很重要，我们在实验的时候切记不可以掉以轻心。