看看这篇文章，了解elisa试剂盒的使用方法

　　elisa试剂盒的使用方法，主要有以下两种方法：
 

　　一、双抗体夹心法
 

　　1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
 

　　2、加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。
 

　　3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
 

　　4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
 

　　5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
 

　　6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
 

　　二、间接法
 

　　1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
 

　　2、次日洗涤3次；
 

　　3、加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
 

　　4、(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml；
 

　　5、37℃孵育35-60分钟，洗涤；
 

　　6、后一遍用DDW洗涤。