小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒操作步骤

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠泛素蛋白(Ub)水平。用纯化的小鼠泛素蛋白(Ub)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入泛素蛋白(Ub)，再与HRP标记的泛素蛋白(Ub)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的。颜色的深浅和样品中的泛素蛋白(Ub)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠泛素蛋白(Ub)浓度。

小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（480ng/L）0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240ng/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液

120ng/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液

60ng/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液

30ng/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液

15ng/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液

3.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

4.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

5.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

8.温育：操作同3。

9.洗涤：操作同5。

10.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

11.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转）。

12.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月