ABC-ELISA材料和方法

BAS酶联免疫吸附试验材料和方法
（以筛选抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体为例）

1 材料
（1） 空肠弯曲菌共同抗原提取物，自制。 BAS酶联免疫吸附试验材料和方法
（2） 生物素化羊抗鼠IgG（BSAMG），卫生部上海生物制品所。
（3） ABC试剂，卫生部上海生物制品所。如ABC试剂需自己配制，可按说明要求，将亲和素与酶标生物素按一定比例混合，置37℃孵育30min后使用。
（4） 被检杂交瘤培养物上清液。
（5） 其他试剂及器材同常规ELISA法。 BAS酶联免疫吸附试验材料和方法

2 方法ABCELISA间接法程序
（1） 用包被液对空肠弯曲菌共同抗原提取物作适当稀释（1∶16），加入反应孔中，每孔01ml，置4℃包被过夜或37℃1～2h。
（2） 用洗涤液洗涤2次，每次1min，沥干。
（3） 加入杂交瘤培养物上清液，每孔01ml。同时作BALB/C小鼠免疫血清（阳性）及正常血清和培养液（阴性）对照，置37℃1～2h。 BAS酶联免疫吸附试验材料和方法
（4） 洗涤3次，方法同上。
（5） 用保温液对生物素化羊抗鼠IgG作适当稀释（1∶400～1∶1000），加入反应孔中，每孔01ml。置37℃孵育1h。
（6） 洗涤3次，方法同上。
（7） 用ABC稀释液或保温液对ABC试剂作适当稀释（1∶100），加入反应孔中，每孔01ml。置37℃孵育30min。 BAS酶联免疫吸附试验材料和方法
（8） 洗涤3次，方法同上。
（9） 加入邻苯二胺底物溶液，每孔01ml，置暗盒内室温显色适当时间（30min）。
（10） 加入2mol/L H2SO4，每孔005ml，终止反应。用酶联检测仪检测结果，并记录其OD值。

3 结果判定以P/N≥2为阳性，或根据自定标准判定。
BAS酶联免疫吸附试验材料和方法
4 注意事项
1 ABCELISA中各要素的*反应条件需经筛选后确定，不能照搬常规ELISA的反应条件。
2 ABCELISA对抗原和抗体（或免疫血清）的质量要求高，否则可造成较高的本底或背景显色。