正常人外周血白细胞的分离-自然沉降法

正常人外周血白细胞的分离-自然沉降法
正常人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000～1000:1，两类细胞的沉降速度不同，进行正常人外周血白细胞分离。

1 、试剂及配制
1）无Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液。
2）含10%～20% 灭活小牛血清Hank’s液。

2 、操作方法
1）取静脉血2ml，放入加有抗凝剂的试管中，轻轻混匀。
2）将试管直立静置于室温或37℃温箱中30～60min，待红细胞自然沉降。此时可见试管中的悬液分3层，上层为淡血浆，底层为红细胞，在紧贴红细胞层上有一呈灰白色的白细胞层（正常人外周血白细胞）。
3） 用毛细管吸取位于红细胞层上面的富含白细胞的细胞悬液，移入另一试管中；
4） 加入无Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min 离心10min，弃上清，同法在洗涤两次。
5）沉淀细胞用适量10%～20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×106 /min。

正常人外周血白细胞的分离-自然沉降法