酶联免疫试剂盒原理及影响因素

       此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过酶联免疫试剂盒检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA(酶联免疫试剂盒)方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

酶联免疫试剂盒在操作过程的影响因素如下：

1、酶联免疫试剂盒操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18C～25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，是否符合要求。

2、酶联免疫试剂盒要保证加液量一致我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。

3、正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。

4、酶联免疫试剂盒显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。

5、手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。

酶联免疫试剂盒的使用注意事项具体如下：

1. 酶联免疫试剂盒在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3. 一次加样时间最好控制在分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

5. 酶联免疫试剂盒的洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

6. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。

7. 刚开启酶联免疫试剂盒的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

8. 酶联免疫试剂盒保存：未开封的试剂盒应储存于2-8℃;开封后的酶标板应与干燥剂一起储存于铝箔袋中置于2-8℃保存。仅在此出储存条件下，产品在有效期内可正常使用。