人（Human）α-生育酚 （α-Tocopherol）ELISA检测试剂盒使用说明

中文说明书 UNIONHONEST
酶联免疫吸附测试 Enzyme Linked Immunosorbent Assay
人 （Human） α-生育酚 （α-Tocopherol） ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆
试验原理：

α-Tocopherol试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知α-Tocopherol浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将α-Tocopherol和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中α-Tocopherol的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型
塑料膜板盖1块半块即用型
标准品：800mg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀
空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型
标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型
生物素标记的抗α-Tocopherol抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型
亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型
洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释
底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型

自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，2．请尽快用水冲洗。
3．实验中不4．要吃喝、抽烟或使用化妆品。
5．不6．要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

ELISA 检测试剂盒操作注意事项
1．试剂应按标2．签说明书储存，3．使用前恢复4．到室温。稀稀过后的标5．准品应丢弃，6．不7．可保存。
8．实验中不9．用的板条应立即放回包装袋中，10．密封保存，11．以免变质。
12．不13．用的其它试剂应包装好或盖好。不同14．批号的试剂不15．要混用。保质前使用。
16．使用一次性的吸头以免交叉污染，17．吸取终止液和底物A、B液时，18．避免使用带金属部分的加样器。
19．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
20．洗涤酶标21．板时应充分拍干，22．不23．要将吸水纸直接放入酶标24．反应孔中吸水。
25．底物A应挥发，26．避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，27．避免长时间暴露于光下。避免用手接触，28．有毒。实验完成后应立即读取OD值。
29．加入试剂的顺序应一致，30．以保证所有反应板孔温育的时间一样。
31．按照说明书中标32．明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不2、含热原和内毒素的试管。收集血液后，3、1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
4、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
5、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
6、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，7、取上清液
8、保存------如果样品不9、立即使用，10、应将其分成小部分-70 ℃保存，11、避免反复12、冷冻。尽可能的不13、要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，14、检测前先离心或过滤。不15、要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备
1．标2．准品：标3．准品的系列稀释应在实验时准备，4．不5．能储存。稀释前将标6．准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

800 mg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
400 mg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 mg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 mg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 mg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 mg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 mg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。

7．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍8．稀释。

操作步骤
1．使用前，2．将所有试剂充分混匀。不3．要使液体产生大量的泡沫，4．以免加样时加入大量的气泡，5．产生加样上的误差。
6．根据待测样品数量加上标7．准品的数量决定所需的板条数。每个标8．准品和空白孔建议做复9．孔。每个样品根据自己的数量来定，10．能使用复11．孔的尽量做复12．孔。标13．本用标14．本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
15．加入稀释好后的标16．准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标17．记的抗体。盖上膜板，18．轻轻振荡混匀，19．37℃温育1小时。
20．甩去孔内液体，21．每孔加满洗涤液，22．振荡30秒，23．甩去洗涤液，24．用吸水纸拍干。重复25．此操作3次。如果用洗板机洗涤，26．洗涤次数增加一次。
27．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，28．轻轻振荡混匀，29．37℃温育30分钟。
30．甩去孔内液体，31．每孔加满洗涤液，32．振荡30秒，33．甩去洗涤液，34．用吸水纸拍干。重复35．此操作3次。如果用洗板机洗涤，36．洗涤次数增加一次。
37．每孔加入底物A、B各50ul，38．轻轻振荡混匀，39．37℃温育10分钟。避免光照。
40．取出酶标41．板，42．迅速加入50ul终止液，43．加入终止液后应立即测定结果。
44．在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案

标准品浓度（mg/ml）
A800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
B400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
C200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
D100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
E5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
F2525样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品
H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能
1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

ELISA 检测试剂盒结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的α-Tocopherol标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的α-Tocopherol含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-800mg/ml

4、敏感度： 1.0 mg/ml