看ELISA试剂盒如何检测丝虫抗体

丝虫病（filariasis）在我国是由斑氏和马来丝虫寄生于人体淋巴系统所引起的慢性寄生虫病，通过蚊虫传播。早期临床特征主要为淋巴管炎和淋巴结炎，晚期为淋巴管阻塞形成象皮肿。常用的检查方法是用ELISA试剂盒检测丝虫抗体。
[临床意义] 丝虫病潜伏期4个月至15年，平均1年左右。流行区可有50％-75％的“无症状”感染者。ELISA法检测丝虫抗体阳性可对该病进行确诊，阴性不能排除丝虫病感染。
1．急性期 突出症状为淋巴结炎、淋巴管炎、精囊炎、丝虫热等。
2．慢性期 由于炎症反复发作，使淋巴管和淋巴结因增生的肉芽组织阻塞，出现*的临床症状和体征。
[检测方法] ELISA试剂盒法
[方法学原理] 将微丝蚴固定在玻片上制成固相抗原片，加入待检血清和酶标记抗体后，若待检血清中存在相应抗体，则形成的抗原抗体复合物附着在玻片上。加入相应底物后显色，在显微镜下进行观察。
[标本准备] 不抗凝静脉血2ml。
[试剂]
1．微丝蚴固相抗原片
2．底物溶液
3．0．2mol／LpH7．6硼酸缓冲液
4．HRP-抗人IgG
5．洗涤液与稀释液
[ELISA试剂盒检测步骤]
1．于抗原点片上滴加1：40和1：80稀释的待检血清，在37C环境中湿盒2h。
2．流水冲去多余血清后于洗涤液中浸洗3次，每次5min。
3．滴加zui适浓度HRP-抗人IgG，在37℃环境中湿盒1h。
4．流水冲去多余血清后于洗涤液中浸洗3次，每次5min。
5．滴加底物1滴于低倍显微镜下观察。
[结果观察] 观察200条微丝蚴，反应结果判定如下。
3+ >95％微丝蚴呈棕色或橙色；
2+ ≥50％微丝蚴呈棕色或橙色；
1+ ≥5％微丝蚴呈棕色、橙色或浅棕色；
± <5％微丝蚴呈浅棕色或橙色；
一 微丝蚴无色或稍呈浅。
凡血清1：40和1：80均为阳性反应（+一+++）者，定为阳性；1：40为“+”或“土”，定为可疑；1：40为“-”者定为阴性。
[参考范围] 丝虫抗体阴性
[ELISA试剂盒检测注意事项]
1．试验前试剂应在室温环境中平衡30min。
2．洗涤时应注意不能将玻片上的固相抗原冲掉。