用elisa试剂盒检测样本的原理和步骤

1.elisa试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头 ，避免交叉污染。
2．加样：加样时，要控制加样速度，避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性；一般加样时间控制在10分钟内，如果样本数量过多，可使用多道移液器 。
3.孵育：样品要在密闭的容器内进行孵育，严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4.洗涤：洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸 上充分拍干，同时要消除板底残留的液体和手指痕迹，避免影响zui后的酶标仪 读数。
5.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，10分钟左右），如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。|
6.建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。|7.建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
操作步骤
1. 取出elisa试剂盒，于室温（20-25℃）放置15-30分钟。实验过程应在室温（20-25℃）内进行。
2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏 水；
4. 在样品孔中加入10μl的生物素；（不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！）
5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液；（不含空白对照孔）
6. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时；（在孵育箱中保持稳定的温度与湿度）
7. 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；（浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释）
8. 酶标板洗涤后用吸水纸*拍干；
9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl；（不含空白对照孔）
10. 20-25℃下避光反应15分钟；
11. 各孔加入50μl终止液，终止反应；
结果判断
1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；
2. 以OD值为纵坐标，以标准品的浓度为横坐标，绘制曲线图；
3. 根据样品的OD值查找对应的浓度范围；
4. 敏感度：0.1 ng/ml