ELISA试剂盒的双抗体夹心法检测脑膜炎奈瑟菌可溶性抗原

ELISA试剂盒的实验原理

用包被于固相载体的脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）多糖抗体，结合待测标本中的相应抗原，再加酶标抗体形成夹心，zui后加底物使显色。显色深浅在一定范围内与标本中脑膜炎奈瑟菌抗原的含量呈正相关。

主要试剂与器材

1.待检血清或脑脊液；

2.抗脑膜炎奈瑟菌（A群）多糖抗体；

3.辣根过氧化酶（HRP）标记抗体；

4.包被液、稀释液、终止液；

5.酶标仪。

ELISA试剂盒的操作步骤

1.包被抗体的制备：抗脑膜炎奈瑟菌血清用50%饱和硫酸铵盐析，再通过SPA-Sepharose 4B免疫吸附柱，获取IgG用于包被。

2.用包被液将包被抗体稀释成20μg/ml，每孔100μl，4℃12h后用PBS洗3次。

3.待测标本（需经56℃，30min灭活）孵育2h，洗3次，拍干。

4.每孔加酶标抗体（zui适工作稀释度用方阵法选定）100μl，37℃孵育2h后洗3次，拍干。

5.每孔加底物（邻苯二胺-H2O2）溶液100μl，37℃ 20min显色，用2mol/L H2SO4终止反应，测492nm吸光度（A）。

ELISA试剂盒的结果分析

用50-100份健康人混合血清按上述elisa测A值，以大于此A值均值的两个标准差为阳性，也可以P/N值≥2.1为阳性。