ELISA试剂盒实验的过程中遇到的问题

大家在做ELISA试剂盒实验的过程中，难免会遇到各种不同的问题，比如标准曲线不好，试剂盒的回收率，假阴性，假阳性，实验的重复性不好等等。现在上海劲马生物科技有限公司就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问！
曲线问题： 
1.OD值不正常
试剂盒未回温，试剂盒回温到25℃
温度控制不好，控制正确温度
孵育时间不准确，控制孵育时间
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干
阳光直射，对着风直接吹，避风避
酶标仪的波长错误，酶标仪的波长450nm
抗体的稀释错误，正确的稀释抗体
水质问题，用娃哈哈矿泉水代替
2.白   板
洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液
少加液体（错加液体），正确的步骤加液体
3.无 梯 度
标准品也污染，换标准品点板
OD值不正常，控制温度时间在做一次
人为点板，不要点板
4.线 性 不 好
OD值不正常，控制温度时间在做一次
回收率
1.空白管阳性高
样本本身就是阳性样本，换阴性样本做回收率
空白管在实验中被污染，实验中防止交叉污染
水质原因用，娃哈哈矿泉水代替
2.偏  高
添加量不准确，的添加量
添加浓度不适合，添加合适的浓度
取液吹干量多，准确的取液吹干
取到其它相层液体，取需用相吹干
复溶液未稀释或加入量少，正确的稀释复溶液
3.偏  低
添加量不准确，的添加量
添加浓度不适合，添加合适的浓度
取液吹干量少，准确的取液吹干
复溶液稀释错误或加入量多，正确的稀释复溶液
假阴、阳性
1，水质原因：点复溶液验证，用娃哈哈矿泉水代替
2，实验操作原因
吸取到其它相吹干，准确的取液吹干
离心不*，延长离心时间
样本的污染，更换样本
乳化未处理*，温浴（70℃）处理乳化现象
3，仪器试剂原因
离心管未清洗干净，正确的洗涤器具
有机溶剂的影响，做试剂空白看影响结果
4，衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）,更换衍生化试剂
5，与曲线好坏相关,，保证曲线的正常