ELISA试剂盒方法对献血者梅毒抗体的筛检价值

梅毒螺旋体抗体检测作为输血安全的必测指标，其试验方法与试剂的选择尤为重要，ELISA试剂盒法筛检梅毒抗体是目前普遍采用的方法，有关梅毒抗体ELISA试剂盒的评价报道较多，但多为灵敏度或特异度等少数评价指标 ［1，2］ 为了全面客观地评价ELISA方法对无偿献血者梅毒抗体的筛检价值，筛检的真实性和可靠性，笔者对我们常用的两种筛检试剂盒的检测真实性、可靠性及Cut-off值的合理性进行评价，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 梅毒抗体血清盘血清40份（购自卫生部临床检验中心，批号:200103，其中阳性22份，阴性18份），另外随机抽取西安市有代表性的无偿献血者梅毒抗体阴性血清100人份。梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒分别由上海伊丽萨生物科技有限公司（以下称ELISA1）和美国诺泰公司（以下称ELISA2）提供。
1.2 方法
1.2.1 抽样方法 
将2003年1～5月西安市某血液中心无偿献血者梅毒抗体阴性血清标本按顺序、年龄、职业、文化程度分层，再按随机表中随机数字抽样，分层特征比例按该血液中心前3年无偿献血者以上分层特征构成比例进行，抽满100例为止。
1.2.2 盲法筛检
由评价监督者对考核血清盘重新编密码，由2名操作熟练的专业检验人员对编码血清盘用上述2种试剂盒进行盲法检测，操作严格按试剂盒说明书进行，筛检结果由全自动酶标仪自动打印OD值及阴、阳性结果。为考核试剂盒的可靠性，由2名以上专业检验人员在条件*相同的情况下，对考核血清盘40份血清进行第二次盲法筛检，第二次筛检前重新编密码，结果判读后再打开密码，核对结果。
1.2.3 金标准的确定
卫生部临床检验中心梅毒抗体血清盘已知阳性与阴性为金标准。
1.2.4 其实性评价
将40份血清盘标本分为梅毒抗体阳性与阴性组，再将筛检试剂盒的筛检结果分为梅毒抗体阳性与阴性组，分组数据汇入筛检与诊断试验评价四格表，用分式 ［3］ 分别计算出真实性评价的8个指标，即灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性预告值、阴性预告值、准确度及约登指数。1.2.5 可靠性评价
将40份血清盘样本*次与第二次筛检结果，分别汇入四格表，分别计算出各试剂盒重复试验的符合率与卡帕值，卡帕值的判定标准按Fleiss提出的3级划分标准评价，即0.75～1.00为符合很好，0.4～0.74为一般符合，0.01～0.39为缺乏符合 ［3］ 。
1.2.6 Cut-off值评价方法
为了评价两种试剂盒截断点或临界值的合理性，将考核血清盘中18份阴性血清及随机抽取的西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100人份测量出的OD值编制频数分布表，按筛检试验正常值范围确定方法 ［4］ ，分别用统计学界限的正态分布法及百分位数法计算出每种试剂盒的Cut-off值，并与按试剂盒说明书规定计算出的Cut-off值比较，结合阴性、阳性OD值频数分布特点，分析评价其合理性。
2 结果
2.1 对考核血清筛检结果 在已知22份阳性中，ELISA试剂盒1筛检出21份，ELISA2筛检出22份，在已知18份阴性标本中，ELISA1与ELISA2均检出17份。
2.2 真实性评价 利用两种试剂盒的筛检结果，计算出评价真实性的8个指标。
2.3 可靠性评价 ELISA1与ELISA2两次重复检出的阳性份数相同，重复试验的符合率均为100%，卡帕值均为1.00。
2.4 Cut-off值的评价
依据ELISA1与ELISA2试剂盒对考核血清盘18份阴性血清及100份西安市无偿献血者梅 毒抗体阴性血清测量的OD值，用统计学界限的正态分布法与百分位数法分别计算其Cut-off值，按两种ELISA试剂盒说明书规定方法分别计算出zui低Cut-off值，并将3种Cut-off值进行比较。结果发现，按规范的正态分布法与百分位数法计算出的Cut-off值均远低于试剂盒说明书规定的Cut-offzui小值，但结合140份无偿献血者阳性与阴性OD值实际频率分布特点分析，试剂盒规定的截断点是合理的，如果按统计界限计算的Cut-off值判读，并不能提高试剂盒的灵敏度，反而会使假阳性率升高。 
ELISA1及ELISA2的灵敏度分别为95.5%，100.0%，特异度分别为94.4%，94.4%，约登指数分别为0.90，0.94，两种试剂的重复符合率均为100.0%，两种试剂的Cut-off值是合理的。
3 讨论
评价某项筛检试验需要有一个*的客观性强的金标准，卫生部临床检验中心的梅毒抗体考核血清盘样本来自献血人群，阴、阳性界限清楚，含有梅毒抗体多种效价的血清，客观性强，是*的金标准。对于筛检试验的评价不仅要评价灵敏度、特异度，还需评价约登指数等多项综合性指标及可靠性指标，而且还需要对试剂盒阴性与阳性的截断点（Cut-off值）的合理性进行评价。
在既往文献中仅有个别报道用多项评价真实性指标进行评价 ［5］ 。本研究使用ELISA试剂盒方法对梅毒抗体进行筛检，并对该试验的两种ELISA试剂盒的多项真实性指标进行了客观评价，而且对可靠性指标及Cut-off值的合理性进行了分析、比较与评价，结果发现，ELISA2的灵敏度与应用价值更大。根据考核血清盘中阴性血清及无偿献血者梅毒抗体阴性血清共118份筛检结果的OD值，分别用正态分布法及百分位数法计算出Cut-off值，发现计算值远低于试剂盒规定的zui小Cut-off值，但结合118份阴性与22份阳性标本实际分布特点分析，试剂盒规定的Cut-off值是合理的，因为如果按理论计算值作为截断点，会使筛检试验的假阳性率提高，造成血液资源浪费，从而降低其在献血员筛检中的应用价值。两种试剂联合筛检可保证输血的安全性，如果能进一步提高试剂的灵敏度与特异度，将会具有更大的临床应用价值。