人癌胚抗原（CEA）elisa试剂盒说明书

人癌胚抗原(CEA)elisa试剂盒说明书
【原理】
    利用双抗体夹心技术，将抗CEA的单克隆抗体包被于聚苯乙烯塑料珠上，制成固相抗体珠，用此珠去吸附样品中的CEA，充分洗涤后再依次与酶标记CEA抗体与底物反应，以成色后的吸光度值从剂量反应曲线查得样品中的cEA含量。
【试剂】
    1.CEA标准液 用纯化CEA配制为浓度分别为0、1.5、3.0、10.0、20.ong/ml系列标准液。
    2.CEA抽提液0.Zmol/L醋酸钠缓冲液(pHS.0)。
    3.基质应用液取邻苯二胺80mg溶于pHS.O磷酸一拘摊酸缓冲液50ml中，56℃水浴中助溶。*溶后加人新鲜的30%HZ认20川，混匀。此基质液呈无色透明液体，若显不能使用。将此底物液贮于棕色瓶中，30而n内用完。
    4.辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗CEA抗体。
    5.洗涤液0.osmol/LP赘(pH7.40)一0.1%Tween一20.
    6.抗CEA单克隆抗体包被的圆珠.
    7.待检血样血清(浆)。
人癌胚抗原(CEA)elisa试剂盒说明书【操作步骤】
    1.待检抗原的制备取待检血清或血浆0.sml，加0.Zmol/L醋酸钠缓冲液
(pHS.o)1.oml，混匀后于70℃水浴内15min。以3 000r/而n离心10而n。取上清液作
为3倍稀释的待检抗原。阳性对照品必须同步处理。
    2.在20孔反应板上每孔中加人上述(*步操作)待检抗原0.Zml。同时加人
CEA标准抗原及阳性对照抗原。每份样品均作平行两孔。
    3.用镊子夹起CEA固相抗体珠，甩掉附着的液体后投人孔内。反应板上班盖一张
干净纸，将板漂浮于37℃水浴中反应Zh。注意勿盖水箱盖，反应完成后可连续操作或
置4℃。
    4.用PBS一Tween一20洗涤液洗涤3次。每次加入洗涤液后放置3而n再抽净(负压抽吸)洗液。zui后一次洗液放人后静置至准备加酶标记抗CEA之前时再抽净。
    5.二抗液制备 取每支冻干的酶标记抗CEA抗体用蒸馏水1.Oml溶解，因冻干时加有明胶保护剂，溶解时须放置37℃水浴中lmin。待充分溶解后再按要求稀释至zui适工作浓度。
    6.将孔中洗涤液抽净，每孔加人酶标记抗CEA工作液0.Zml，将反应板用干净纸覆盖后再漂浮于37℃水浴中反应2h，勿盖水箱盖。
    7.用PBS一Tween一20洗液洗涤4~5次。末次洗液放人后静里至加基质液前。
    8.将孔中洗液抽净，把反应板与装有75mmX12mm试管的20孔纸盒按编号对好位置，翻转反应板使扣在纸盒上，将圆珠对号移人纸盒上的试管中，每管加人新鲜配制的底物应用液0.3ml。另取一支干净试管加基质应用液。.3ml，供测定吸光度时调零使用。避光，室温中反应30min。
    9.每管加人lmol/L HCI 2.0ml终止反应.
    10.于492nm波长处，1.0cm比色皿用空白管调零，测定吸光度(应于终止反应lh内完成)。
【参考范围】
    正常成人(96%~97%)血清CEA含量<2.5拌g/L;
    大量吸烟者(20%~40肠)>2.5拌g/L，有的甚至>5拌盯Lo
【注意事项】
    1.由于CEA提纯和单克隆抗体制备的技术很复杂，目前临床上多购买厂家生产的试剂盒进行测定.不同厂家生产的CEA诊断试剂，由于方法学及抗血清特异性的差异，测定值可能会有差别。不同批号的试剂严禁混合使用。试剂盒应4℃存放，并避免强光照射。
    2.20孔反应板及试管使用后，反应板可用洗板机清洗;也可用水洗净，后浸泡于硫酸一铬酸洗液中，再经自来水、蒸馏水冲洗干净，干燥后可再次使用。
    3.基质液配制与使用过程中，禁与金属物品或其他氧化物接触，不得使用塑料容器。
    4.受检血清应新鲜，避免反复冻融。
人癌胚抗原(CEA)elisa试剂盒说明书【临床意义】
    1.测定胃液和唾液的CEA对胃癌的诊断较有意义。胃液中的CEA含量一般高于血清中含量的1.5~15.5倍，而且较血中CEA升高较早。如果血中CEA在高水平上波动，而胃血CEA比值>1，则有利于胃癌的诊断，预后不良。唾液中的CEA更高于胃液，唾液CEA显著升高时与胃癌诊断的符合率高达90%.
    2.CEA是各脏器癌的广谱肿瘤标记物，特异性差，无助于各种肿瘤的早期诊断，但有助于鉴别肿瘤的良性和恶性。CEA测定可作为肿瘤手术成败的检测指标，对肿瘤的复发、转移及预后判断有一定的价值。
    3.高浓度的血清CEA含量与结肠癌相关，但无早期诊断价值。CEA升高也见于肠梗阻、胆道梗阻、尿毒症、胰腺炎、肝硬化、结肠或直肠息肉、溃疡性结肠炎、局限性肠炎和溃疡病。