鸡病（DEV）酶联免疫分析试剂盒使用

鸡病(DEV)酶联免疫分析试剂盒使用
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因   NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.  编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照  2孔、阳性对照  2孔、空白对照   1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.  加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照    50µl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液  40µl，然后再加待测样品  10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.  温育：用封板膜封板后置  37℃温育30分钟。
4.  配液：将  30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置  30秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂  50µl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液    50µl，终止反应（此时蓝色立转）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD值<临界值（CUT    OFF）者为传染性法氏囊病毒抗体（IBDV-Ab）
阴性
阳性判定：样品 OD值≥临界值（CUT    OFF）者为传染性法氏囊病毒抗体（IBDV-Ab）
阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为  630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M的硫酸，使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月